محیط کشت نیترات براث

محیط کشت نیترات براث کیولب

محیط نیترات براث یک محیط مایع شفاف است که برای بررسی توانایی میکروارگانیسم‌ها در انجام فرآیند کاهش نیترات به نیتریت و یا گاز نیتروژن به‌کار می‌رود.
هدف از این آزمایش، تشخیص وجود آنزیم نیترات ردوکتاز در سلول باکتری است. باکتری‌هایی که دارای این آنزیم هستند، می‌توانند نیترات (NO₃⁻) را به نیتریت (NO₂⁻) و در برخی موارد تا نیتروژن گازی (N₂) کاهش دهند.

این محیط به‌گونه‌ای طراحی شده که برای رشد بسیاری از باکتری‌ها از جمله گونه‌های هوازی و بی‌هوازی اختیاری (Facultative Anaerobes) مناسب است. محیط نیترات براث معمولاً به صورت پودر آماده عرضه می‌شود و تنها کافی است در آب مقطر حل و استریل گردد.

ترکیبات و فرمولاسیون محیط

محیط نیترات براث از چند جزء اصلی تشکیل شده که هر کدام نقش ویژه‌ای در رشد باکتری و انجام واکنش شیمیایی دارند.

در ترکیب آن، عصاره گوشت (Beef Extract) حدود سه گرم در لیتر وجود دارد که منبع غنی از ویتامین‌ها و مواد معدنی برای رشد میکروبی است. پپتون (Peptone) به میزان چهار گرم در لیتر اضافه می‌شود تا به عنوان منبع نیتروژن و آمینواسید عمل کند.
همچنین در ترکیب این محیط، پروتئوز پپتون شماره سه (Proteose Peptone No.3) حدود یک گرم در لیتر وجود دارد که باعث تقویت رشد باکتری‌ها و فعالیت آنزیمی آن‌ها می‌شود.
عنصر کلیدی این محیط، پتاسیم نیترات (Potassium Nitrate) به مقدار حدود یک گرم در لیتر است که نقش منبع نیترات را بر عهده دارد و اساس انجام آزمایش کاهش نیترات را تشکیل می‌دهد.

پس از آماده‌سازی، pH نهایی محیط حدود ۶٫۸ در دمای ۲۵ درجه سانتی‌گراد است و محیط به رنگ زرد کمرنگ و شفاف دیده می‌شود.

روش آماده‌سازی محیط نیترات براث

برای تهیه محیط نیترات براث مراحل زیر باید انجام شود:

ابتدا مقدار مشخصی از پودر محیط (حدود ۹ گرم در هر لیتر آب مقطر) وزن شده و در آب مقطر حل شود. سپس محلول به‌طور کامل هم زده شود تا هیچ ذره‌ی جامدی باقی نماند. در صورت نیاز، pH محیط تنظیم شود تا به عدد ۶٫۸ برسد. پس از آن محلول در لوله‌های آزمایش یا بطری‌های مقاوم به حرارت تقسیم می‌شود.
مرحله‌ی بعد، استریل‌سازی محیط است که باید در اتوکلاو در دمای ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد و به مدت ۱۵ دقیقه انجام گیرد. پس از خروج از اتوکلاو، محیط باید در دمای اتاق سرد شود تا برای استفاده آماده گردد.

محیط آماده باید شفاف و بدون کدورت باشد. هرگونه تغییر رنگ، رسوب یا بوی غیرطبیعی نشان‌دهنده‌ی فساد محیط است و نباید مورد استفاده قرار گیرد.

شرایط نگهداری

پودر محیط نیترات براث باید در ظرف دربسته، خشک، دور از نور مستقیم خورشید و در دمای کمتر از ۳۰ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود.
محیط آماده‌شده نیز باید در یخچال با دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود و از یخ‌زدگی آن جلوگیری گردد.
به هیچ عنوان از محیط‌هایی که تاریخ انقضای آن‌ها گذشته یا ظاهرشان تغییر کرده استفاده نشود، زیرا ممکن است نتایج آزمایش را مخدوش کنند.

خرید محیط کشت براث نیترات

کاربردهای محیط نیترات براث

۱. استفاده در تشخیص میکروبی

اصلی‌ترین کاربرد محیط نیترات براث، تشخیص توانایی باکتری‌ها در انجام واکنش کاهش نیترات است.
این تست برای شناسایی باکتری‌هایی مانند انتروباکتریاسه‌ها (Enterobacteriaceae) بسیار مهم است، زیرا بسیاری از آن‌ها نیترات را به نیتریت کاهش می‌دهند. در مقابل، برخی دیگر فاقد این توانایی‌اند.

از طریق مشاهده تغییر رنگ محیط پس از افزودن معرف‌ها، می‌توان به وجود یا عدم وجود آنزیم نیترات ردوکتاز در سلول پی برد.

۲. استفاده در کنترل کیفی صنایع غذایی

در صنایع غذایی، بررسی آلودگی‌های میکروبی اهمیت ویژه‌ای دارد. برخی میکروب‌های خاص قادر به کاهش نیترات در محصولات غذایی هستند. استفاده از این محیط به کارشناسان کنترل کیفیت کمک می‌کند تا وجود چنین میکروب‌هایی را شناسایی و از آلودگی جلوگیری کنند.

۳. کاربرد در پژوهش‌های علمی

در پژوهش‌های میکروبیولوژی، محیط نیترات براث برای بررسی مسیرهای متابولیکی نیتروژن و فعالیت آنزیم نیترات ردوکتاز استفاده می‌شود.
مطالعات روی فرآیند دنیتریفیکاسیون (کاهش نیترات به نیتروژن گازی) نیز با استفاده از این محیط انجام می‌گیرد.

۴. شناسایی مایکوباکتری‌ها

برخی از گونه‌های مایکوباکتری‌ها، از جمله مایکوباکتریوم توبرکلوزیس (عامل سل)، قادر به کاهش نیترات هستند. از این رو این محیط در آزمایش‌های افتراقی مایکوباکتری‌ها نیز مورد استفاده قرار می‌گیرد.

مراحل انجام آزمایش کاهش نیترات

برای انجام آزمایش کاهش نیترات با محیط نیترات براث، مراحل زیر طی می‌شود:

ابتدا از یک کشت خالص باکتری، مقدار کمی نمونه به داخل لوله‌ی حاوی محیط نیترات براث تلقیح می‌شود. سپس لوله‌ها در دمای ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت انکوبه می‌شوند تا واکنش کاهش نیترات انجام گیرد.

پس از انکوباسیون، دو معرف شیمیایی اضافه می‌شوند: معرف اول سولفانیلیک اسید (محلول A) و معرف دوم آلفا نفتیل‌آمین (محلول B).
در صورت وجود نیتریت، محیط به رنگ قرمز درمی‌آید که نشان‌دهنده‌ی نتیجه‌ی مثبت است.

اگر پس از افزودن معرف‌ها هیچ تغییر رنگی مشاهده نشود، مقدار کمی پودر روی (Zn) اضافه می‌شود.
اگر پس از افزودن روی محیط قرمز شود، نتیجه منفی است زیرا نیترات کاهش نیافته و توسط روی به نیتریت تبدیل شده است. اما اگر همچنان بی‌رنگ بماند، نشان‌دهنده‌ی این است که نیترات کاملاً به نیتروژن گازی کاهش یافته و نتیجه مثبت است.

محیط کشت نیترات براث nitrate

تفسیر نتایج آزمایش

اگر پس از افزودن معرف‌ها محیط به رنگ قرمز تغییر کند، به معنی آن است که نیترات به نیتریت کاهش یافته است و آزمایش مثبت تلقی می‌شود.
در صورتی که هیچ تغییری در رنگ محیط مشاهده نشود و پس از افزودن گرد روی نیز رنگ قرمز ایجاد شود، نتیجه‌ی آزمایش منفی خواهد بود زیرا نیترات در طول انکوباسیون کاهش نیافته بود.
اما اگر پس از افزودن روی هیچ تغییری در رنگ دیده نشود، به این معناست که نیترات به گاز نیتروژن تبدیل شده و آزمایش کاملاً مثبت است.

مزایای محیط نیترات براث

محیط نیترات براث دارای ویژگی‌هایی است که آن را به یکی از محیط‌های پرکاربرد در میکروبیولوژی تبدیل کرده است.

این محیط ساده، ارزان و قابل تهیه است و به سرعت نتایج را نشان می‌دهد. با توجه به شفاف بودن آن، تغییر رنگ به وضوح قابل مشاهده است.
همچنین برای طیف وسیعی از میکروارگانیسم‌ها مناسب است و به راحتی در آزمایشگاه‌های آموزشی، بالینی و تحقیقاتی استفاده می‌شود.
به‌دلیل هزینه پایین و نگهداری آسان، این محیط انتخابی ایده‌آل برای انجام تست‌های بیوشیمیایی پایه‌ای است.

محدودیت‌ها و نکات مهم

استفاده از محیط نیترات براث نیز مانند سایر محیط‌ها نیازمند دقت و رعایت اصول استاندارد است.
اگر زمان انکوباسیون بیش از حد طول بکشد یا دما مناسب نباشد، ممکن است نتایج کاذب ایجاد شود.
همچنین باید از معرف‌های تازه استفاده شود، زیرا معرف‌های کهنه واکنش رنگی مطلوبی ایجاد نمی‌کنند.
وجود آلودگی در نمونه نیز می‌تواند نتیجه آزمایش را تغییر دهد، بنابراین استفاده از کشت خالص الزامی است.

کنترل کیفیت در استفاده از محیط نیترات براث

برای اطمینان از صحت عملکرد محیط، باید همواره کنترل‌های مثبت و منفی انجام شود.
به عنوان کنترل مثبت، معمولاً از باکتری‌هایی که توانایی کاهش نیترات دارند مانند Escherichia coli استفاده می‌شود.
برای کنترل منفی، از باکتری‌هایی مانند Acinetobacter lwoffii استفاده می‌شود که فاقد آنزیم نیترات ردوکتاز هستند.

در کنار این موارد، ظاهر محیط باید از نظر شفافیت و رنگ بررسی شود و از آب مقطر خالص و ظروف تمیز در زمان تهیه استفاده گردد.

مزایای خرید محیط نیترات براث از فروشگاه آریاطب

فروشگاه تجهیزات پزشکی آریاطب به عنوان یکی از تأمین‌کنندگان معتبر مواد و محیط‌های آزمایشگاهی، محیط نیترات براث را با بالاترین کیفیت و استانداردهای بین‌المللی عرضه می‌کند.

برخی از مزایای خرید از آریاطب شامل موارد زیر است:

• عرضه‌ی محصولات اصل و دارای گواهی استاندارد

• ارائه‌ی مشخصات فنی و برگه اطلاعات محصول (Data Sheet)

• ارسال سریع و بسته‌بندی ایمن برای جلوگیری از آسیب‌دیدگی

• مشاوره رایگان پیش از خرید توسط کارشناسان میکروبیولوژی

• تضمین اصالت کالا و تاریخ انقضای معتبر

به این ترتیب، آریاطب انتخابی مطمئن برای آزمایشگاه‌های تشخیصی، مراکز دانشگاهی و واحدهای کنترل کیفیت صنعتی است.