محیط کشت tsa

تریپتیک سوی آگار (TSA)، یا Tryptic Soy Agar، یکی از محیط‌های کشت عمومی و پر مصرف در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی است. این محیط جامد قابلیت رشد طیف وسیعی از میکروارگانیسم‌ها را دارد، شامل باکتری‌های سریع و بعضی باکتری‌های فستیدیوس، قارچ‌ها و مخمرها.

نام‌های دیگر TSA شامل Casein‑Soya Bean Digest Agar نیز می‌شود.

به دلیل ترکیب پپتون‌های کازئینی و سویا، TSA منبع غنی از نیتروژن، اسیدهای آمینه، پپتیدها و سایر ترکیبات ضروری برای رشد میکروب‌ها فراهم می‌کند. سدیم کلرید نیز در ترکیب آن برای حفظ تعادل اسمزی محیط استفاده شده است.

pH نهایی این محیط معمولاً در حدود ۷.۳ ± ۰.۲ است.

ترکیب شیمیایی و فرمولاسیون TSA

ترکیبات کلیدی TSA عبارتند از:

• پپتون کازئینی (Pancreatic digest of casein): حدود ۱۵ گرم بر لیتر، منبع اسیدهای آمینه و پپتیدها.

• پپتون سویا (Peptic digest of soybean meal): حدود ۵ گرم بر لیتر، منبع نیتروژن، ویتامین‌ها و کربن.

• سدیم کلرید (NaCl): ۵ گرم بر لیتر، برای حفظ فشار اسمزی.

• آگار (Agar): حدود ۱۵ گرم بر لیتر، عامل جامدسازی محیط.

• در برخی فرمول‌ها ممکن است بافر یا قند (مثل دی‌پتاسیم فسفات یا گلوکز) برای غنی‌سازی اضافه شود.

اصول و مکانیسم عملکرد

TSA به عنوان یک محیط عمومی، اصول ساده‌ای دارد:

1. تأمین منابع مغذی: پپتون‌ها اسیدآمینه، پلی‌پپتید و سایر ترکیبات نیتروژنی مورد نیاز رشد را فراهم می‌کنند.

2. تعادل اسمزی: سدیم کلرید فشار اسمزی محیط را کنترل می‌کند تا سلول‌ها دچار شوک اسمزی نشوند.

3. جامد شدن: آگار عامل ژل‌سازی محیط است و امکان کاشت روی پلیت را فراهم می‌کند.

4. قابلیت افزودنی: TSA قابل غنی‌سازی است؛ می‌توان به آن خون یا آنتی‌بیوتیک اضافه کرد تا محیط انتخابی یا غنی‌تر شود.

5. پایه برای محیط‌های تخصصی‌تر: بسیاری از محیط‌های اختصاصی مانند آگار خونی یا چاکلت روی پایه TSA ساخته می‌شوند.

آماده‌سازی محیط TSA

آماده‌سازی TSA معمولاً شامل مراحل زیر است:

1. وزن‌کردن پودر: حدود ۴۰ گرم پودر TSA را در یک لیتر آب مقطر حل می‌کنند.

2. حرارت ملایم: محلول را گرم می‌کنند تا آگار و پپتون‌ها حل شوند.

3. استریل‌سازی: محلول را در اتوکلاو در دمای ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه استریل می‌کنند.

4. خنک‌سازی: محیط را به دمای حدود ۴۵‑۵۰°C می‌رسانند تا برای ریختن در پلیت‌ها آماده شود.

5. ریختن در پتری دیش: محیط خنک‌شده را به ظروف پتری منتقل کرده و اجازه می‌دهند جامد شود.

6. ذخیره‌سازی: پلیت‌ها پس از سرد شدن و بسته‌بندی مناسب نگهداری می‌شوند.

محیط کشت تریپتیک سوی آگار

کاربردها و مزایای TSA

• رشد گسترده میکروارگانیسم‌ها: مناسب برای باکتری‌های فستیدیوس و غیر فستیدیوس، مخمرها و قارچ‌ها.

• نگهداری باکتری‌های استوک: برای کشت ذخیره‌ای سویه‌های خالص استفاده می‌شود.

• تست شمارش کل میکروب‌ها: در آزمون‌های شمارشی، نمونه‌گیری سطحی و فیلتر غشایی کاربرد دارد.

• تست همولیز: زمانی که TSA با خون غنی شود، امکان بررسی همولیز وجود دارد.

• کنترل کیفیت و آزمایش‌های دارویی / غذایی: در آزمایشگاه‌های کنترل کیفیت برای تست آلودگی میکروبی کاربرد دارد.

• پایه برای محیط‌های تخصصی‌تر: محیط‌هایی مانند آگار خونی یا چاکلت روی TSA ساخته می‌شوند.

شرایط رشد و انکوباسیون

• معمولاً پس از تلقیح نمونه روی TSA، در دمای ۳۰‑۳۵°C و به مدت ۱۸‑۲۴ ساعت انکوبه می‌شود.

• در برخی پروتکل‌ها ممکن است تا ۷۲ ساعت انکوباسیون نیاز باشد.

• روش‌های تلقیح: استریپ، پخش سطحی یا فیلتراسیون غشایی.

محیط کشت tsa مرک

کنترل کیفیت TSA

• تست عملکرد رشد: با سویه‌های استاندارد برای اطمینان از قابلیت رشد محیط.

• ظاهر محیط: پودر یکنواخت و رنگ بژ روشن؛ محیط آماده شفاف یا کمی مات.

• pH نهایی: باید در محدوده مشخص باشد.

• استریل بودن: قبل از استفاده اطمینان از عاری بودن محیط ضروری است.

نگهداری و پایداری TSA

1. نگهداری پودر TSA: در ظرف کاملاً دربسته، دمای زیر ۳۰°C.

2. نگهداری پلیت‌های آماده: در یخچال (۲‑۸°C)، به صورت وارونه و بسته‌بندی شده.

3. ایمنی: پودر خشک ممکن است تحریک‌کننده پوست و چشم باشد؛ استنشاق گرد آن باید کمینه شود.

محدودیت‌ها

• عدم انتخاب‌پذیری: TSA به تنهایی محیط انتخابی نیست.

• محدودیت برای باکتری‌های بسیار فستیدیوس: نیاز به افزودن مواد غنی‌کننده دارد.

• پایداری صفحه آماده: اگر به درستی نگهداری نشود، خشک یا ترک‌خورده می‌شود.

• هزینه نگهداری: نیاز به یخچال و فضای ذخیره‌سازی.

جمع‌بندی

TSA یک محیط کشت پایه، مطمئن و منعطف است که طیف وسیعی از میکروب‌ها را پوشش می‌دهد و کاربردهای متنوعی در آزمایشگاه‌های تحقیقاتی، صنعتی و کنترل کیفیت دارد. معرفی دقیق و کاربردی TSA در فروشگاه آریاطب باعث افزایش اعتماد مشتریان و بهبود تجربه خرید می‌شود و با رعایت اصول سئو، دیده شدن محصول در موتورهای جستجو افزایش می‌یابد.